成本較高：一步法免染 SDS-PAGE 凝膠快速制備試劑盒由于包含預(yù)混試劑、特殊免染染料等，研發(fā)和生產(chǎn)成本較高，導(dǎo)致市場(chǎng)售價(jià)相對(duì)昂貴。對(duì)于一些預(yù)算有限的實(shí)驗(yàn)室或大規(guī)模常規(guī)實(shí)驗(yàn)，使用該試劑盒會(huì)大幅增加實(shí)驗(yàn)成本。而傳統(tǒng)方法中，科研人員可自行采購(gòu)基礎(chǔ)試劑進(jìn)行凝膠配制，在原材料成本控制上更具靈活性，長(zhǎng)期使用下成本更低。

部分實(shí)驗(yàn)適用性受限：免染技術(shù)雖然方便快捷，但在某些特定實(shí)驗(yàn)中存在局限性。例如，對(duì)于低豐度蛋白質(zhì)的檢測(cè)，傳統(tǒng)染色方法如銀染具有更高的靈敏度，能夠檢測(cè)到含量極少的蛋白質(zhì)。而一步法免染試劑盒中的染料，在檢測(cè)低豐度蛋白質(zhì)時(shí)，可能因信號(hào)較弱而無(wú)法準(zhǔn)確呈現(xiàn)，導(dǎo)致漏檢。此外，若實(shí)驗(yàn)需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜分析，傳統(tǒng)染色方法（如考馬斯亮藍(lán)染色）在脫色后對(duì)蛋白質(zhì)的影響較小，不干擾質(zhì)譜鑒定；但免染試劑盒中的染料可能會(huì)與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合，影響質(zhì)譜分析的準(zhǔn)確性和靈敏度。

缺乏實(shí)驗(yàn)靈活性：傳統(tǒng) SDS-PAGE 凝膠制備方法允許科研人員根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求，靈活調(diào)整凝膠濃度、緩沖液配方等參數(shù)。例如，針對(duì)不同分子量范圍的蛋白質(zhì)樣品，可精確配制合適濃度的凝膠，以達(dá)到最佳分離效果；在緩沖液中添加特定成分，還能研究蛋白質(zhì)在特殊環(huán)境下的分離特性。而一步法免染試劑盒的預(yù)混配方相對(duì)固定，雖然能滿(mǎn)足大部分常規(guī)實(shí)驗(yàn)，但在應(yīng)對(duì)一些特殊實(shí)驗(yàn)需求時(shí)，無(wú)法像傳統(tǒng)方法那樣自由調(diào)整，限制了實(shí)驗(yàn)的靈活性和創(chuàng)新性。

染料兼容性問(wèn)題：一步法免染 SDS-PAGE 凝膠快速制備試劑盒中的免染染料與部分后續(xù)蛋白質(zhì)分析技術(shù)的兼容性可能存在問(wèn)題。例如，當(dāng)實(shí)驗(yàn)后續(xù)需要使用特定熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測(cè)時(shí)，免染染料的熒光特性可能會(huì)與標(biāo)記抗體的熒光產(chǎn)生干擾，影響熒光信號(hào)的檢測(cè)和分析。相比之下，傳統(tǒng)方法在染色步驟中，可根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的染色方式，有效避免此類(lèi)兼容性問(wèn)題。

保質(zhì)期與儲(chǔ)存要求嚴(yán)格：該試劑盒中的部分成分，尤其是免染染料和聚合相關(guān)試劑，對(duì)儲(chǔ)存條件要求較為嚴(yán)格，通常需要低溫保存，且保質(zhì)期相對(duì)較短。若儲(chǔ)存不當(dāng)或超過(guò)保質(zhì)期，可能會(huì)導(dǎo)致凝膠聚合異常、染料失效等問(wèn)題，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。而傳統(tǒng)方法中使用的基礎(chǔ)試劑，如聚丙烯酰胺、Tris 等，在正確儲(chǔ)存條件下保質(zhì)期較長(zhǎng)，對(duì)儲(chǔ)存環(huán)境的要求相對(duì)寬松，更便于管理和使用。