一、正確儲存方法

（一）儲存環(huán)境要求

（二）包裝完整性檢查

（三）保質期管理

二、正確使用流程

（一）使用前準備

1. 培養(yǎng)基的復溫：從冰箱中取出 PDB 培養(yǎng)基后，不要立即打開包裝進行使用，應先將其放置在室溫環(huán)境下一段時間，使其溫度回升至接近室溫。這樣做可以避免因溫度驟變導致培養(yǎng)基出現(xiàn)冷凝水，影響微生物接種和生長，同時也有利于后續(xù)的溶解和分裝操作。

2. 實驗器具準備：準備好無菌的培養(yǎng)皿、接種環(huán)、移液槍、槍頭、酒精燈等實驗器具。所有器具都需經(jīng)過嚴格的滅菌處理，如培養(yǎng)皿可采用高壓蒸汽滅菌法，在 121℃、103.4kPa 壓力下滅菌 15 - 20 分鐘；接種環(huán)和移液槍頭可使用干熱滅菌或濕熱滅菌的方式進行滅菌，確保實驗過程中不會引入雜菌，保證微生物培養(yǎng)的純度和準確性。

（二）培養(yǎng)基的制備

1. 溶解操作：根據(jù)實驗需求，準確稱量所需量的 PDB 培養(yǎng)基干粉，放入無菌的容器中，加入適量的蒸餾水或去離子水。按照產品說明書的要求，使用磁力攪拌器或玻璃棒不斷攪拌，同時進行加熱（可采用水浴加熱或電爐加熱，但需注意加熱溫度不宜過高，避免培養(yǎng)基成分被破壞），直至培養(yǎng)基溶解，形成均勻的液體。在加熱溶解過程中，要防止培養(yǎng)基溢出或燒焦，若使用電爐加熱，需有人全程值守，攪拌頻率適中，確保培養(yǎng)基受熱均勻。

2. 分裝與滅菌：將溶解后的培養(yǎng)基趁熱分裝到無菌的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。分裝時要注意控制分裝量，避免過多或過少影響微生物的生長空間和營養(yǎng)供給。分裝完成后，立即對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，一般在 121℃、103.4kPa 壓力下滅菌 15 - 20 分鐘，以殺滅培養(yǎng)基中可能存在的微生物和芽孢，保證培養(yǎng)基的無菌狀態(tài)。滅菌結束后，讓培養(yǎng)基在滅菌鍋內自然冷卻，待壓力降至零后，打開鍋蓋取出培養(yǎng)基，放置在無菌環(huán)境中備用。

（三）微生物接種與培養(yǎng)

1. 無菌操作：在接種微生物時，必須嚴格遵循無菌操作原則。在超凈工作臺或無菌室內進行操作，提前打開紫外燈對操作區(qū)域進行滅菌 30 分鐘左右，關閉紫外燈后，打開風機，讓空氣流通一段時間，確保操作區(qū)域達到無菌狀態(tài)。操作過程中，雙手要用 75% 的酒精棉球擦拭消毒，接種環(huán)在使用前后都需在酒精燈火焰上灼燒滅菌，待冷卻后再進行接種操作，避免高溫殺死接種的微生物。

2. 接種方法選擇：根據(jù)不同的微生物種類和實驗目的，選擇合適的接種方法，如劃線接種法、涂布接種法、傾注接種法等。劃線接種法適用于分離純化微生物，通過在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，使微生物逐漸稀釋，形成單個菌落；涂布接種法常用于將菌液均勻分布在培養(yǎng)基表面，適合于菌落計數(shù)等實驗；傾注接種法則是將菌液與冷卻至適當溫度的培養(yǎng)基混合后倒入培養(yǎng)皿中，適用于厭氧菌的培養(yǎng)等。

3. 培養(yǎng)條件控制：接種后的培養(yǎng)基應放置在適宜的培養(yǎng)環(huán)境中進行培養(yǎng)。不同的微生物對培養(yǎng)溫度、濕度和時間的要求各不相同，需根據(jù)微生物的特性進行調整。例如，真菌的培養(yǎng)溫度一般在 25 - 30℃，培養(yǎng)時間通常為 2 - 7 天；細菌的培養(yǎng)溫度和時間則因菌種而異，如大腸桿菌可在 37℃培養(yǎng) 18 - 24 小時。在培養(yǎng)過程中，要定期觀察微生物的生長情況，記錄菌落的形態(tài)、顏色、大小等特征，及時發(fā)現(xiàn)問題并進行處理，如出現(xiàn)污染現(xiàn)象，應立即停止培養(yǎng)并對相關器具和環(huán)境進行消毒處理。