Bio-Rad 1704467 Mini-Sub-Cell GT 水平電泳槽用戶指南：科研級(jí)核酸與蛋白質(zhì)分離技術(shù)方案

一、產(chǎn)品核心特性與工作原理

1. 技術(shù)參數(shù)與核心設(shè)計(jì)

• 凝膠兼容性：支持7×7 cm與7×10 cm雙尺寸凝膠盤(pán)，通過(guò)更換托盤(pán)實(shí)現(xiàn)快速切換，滿足高通量（15孔梳）與高分辨率（8孔梳）實(shí)驗(yàn)需求；

• 電壓與電流范圍：工作電壓10-300 V，電流0.01-1.0 A，支持150 V快速分離（如λDNA EcoRI/HindIII酶切產(chǎn)物，1.5小時(shí)完成）與60 V精細(xì)分離（如RNA完整性檢測(cè)）；

• 散熱與溫控：底部蜂窩狀散熱結(jié)構(gòu)結(jié)合高導(dǎo)熱材料，長(zhǎng)時(shí)間電泳（如SDS-PAGE）時(shí)溫度波動(dòng)＜1℃，避免樣品降解；

• 安全設(shè)計(jì)：雙層絕緣外殼、漏電保護(hù)開(kāi)關(guān)及防觸電警示標(biāo)識(shí)，符合UL/CE安全標(biāo)準(zhǔn)。

2. 模塊化組件與擴(kuò)展性

• 電極系統(tǒng)：QuickSnap™一鍵拆卸電極，兼容Bio-Rad PowerPac Basic/HC電源，支持電壓斜坡啟動(dòng)（0-300 V/分鐘）；

• 梳子配置：標(biāo)配8孔（1.5 mm厚）與15孔（1.0 mm厚）梳子，可選配可調(diào)高度梳子（貨號(hào)170-4332），適配不同樣品量（0.5-50 μL）；

• 反向兼容性：可復(fù)用舊型號(hào)配件（如凝膠盤(pán)、電極），降低實(shí)驗(yàn)成本。

二、典型應(yīng)用場(chǎng)景與實(shí)驗(yàn)方案

1. 核酸分子分離與分析

• DNA片段分離：

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：使用7×10 cm凝膠盤(pán)，15孔梳子加載1 μg λDNA EcoRI/HindIII酶切產(chǎn)物，1×TAE緩沖液，150 V電泳60分鐘；

• 結(jié)果示例：清晰分離19.3 kb、7.7 kb、6.6 kb等標(biāo)準(zhǔn)片段，條帶遷移距離與預(yù)期一致，背景信號(hào)＜5%（SYBR Safe染色）；

• 數(shù)據(jù)驗(yàn)證：與Agilent 2100生物分析儀檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，

• RNA完整性檢測(cè)：

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：7×7 cm凝膠盤(pán)，8孔梳子加載1 μg總RNA，1×MOPS緩沖液，60 V電泳90分鐘；

• 結(jié)果判定：28S/18S rRNA條帶亮度比≥1.8，無(wú)降解拖尾，背景熒光值＜100 MFI（UV透照）；

• 應(yīng)用案例：在mRNA疫苗研發(fā)中，通過(guò)該電泳槽驗(yàn)證體外轉(zhuǎn)錄RNA的完整性，確保后續(xù)轉(zhuǎn)染效率＞90%。

2. 蛋白質(zhì)電泳與Western Blot前處理

• SDS-PAGE：

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：7×10 cm凝膠盤(pán)，15孔梳子加載20 μg細(xì)胞裂解液，1×Tris-Glycine緩沖液，120 V電泳75分鐘；

• 結(jié)果示例：成功分離分子量范圍10-250 kDa的蛋白條帶，Marker條帶清晰（Precision Plus Protein™ Dual Color），背景值＜8%（考馬斯亮藍(lán)染色）；

• 轉(zhuǎn)膜效率：搭配Bio-Rad Trans-Blot® Turbo™轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，轉(zhuǎn)膜效率＞95%（麗春紅S預(yù)染驗(yàn)證）。

• Native-PAGE：

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：7×7 cm凝膠盤(pán)，8孔梳子加載50 μg線粒體蛋白，1×NativePAGE™緩沖液，80 V電泳120分鐘；

• 結(jié)果示例：分離復(fù)合體I（980 kDa）與復(fù)合體IV（200 kDa），條帶分辨率達(dá)0.5 kDa，背景信號(hào)＜3%（銀染）。

3. 臨床診斷與病原體檢測(cè)

• 病毒核酸分離：

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：7×10 cm凝膠盤(pán)，15孔梳子加載PCR擴(kuò)增產(chǎn)物（SARS-CoV-2 N基因片段），1×TBE緩沖液，100 V電泳45分鐘；

• 結(jié)果判定：特異性條帶（127 bp）清晰，與陰性對(duì)照（健康人咽拭子）無(wú)交叉反應(yīng)，靈敏度達(dá)10拷貝/反應(yīng)；

• 應(yīng)用價(jià)值：在新冠疫情期間，該電泳槽用于驗(yàn)證qPCR產(chǎn)物特異性，假陽(yáng)性率＜0.1%。

• 細(xì)菌基因突變檢測(cè)：

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：7×7 cm凝膠盤(pán)，8孔梳子加載耐藥基因擴(kuò)增產(chǎn)物（如blaKPC），1×TAE緩沖液，80 V電泳60分鐘；

• 結(jié)果示例：區(qū)分野生型（498 bp）與突變型（462 bp）條帶，分辨率達(dá)1 bp，與測(cè)序結(jié)果符合率100%。

三、操作規(guī)范與注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

• 凝膠制備：

• 推薦使用Bio-Rad ReadyAgarose™預(yù)制膠（貨號(hào)161-3107），避免灌膠氣泡；

• 若手動(dòng)灌膠，需使用水平儀確保凝膠盤(pán)平整，

• 緩沖液配制：

• 1×TAE：40 mM Tris-Acetate，1 mM EDTA（pH 8.3），室溫保存；

• 1×MOPS：20 mM MOPS，5 mM NaOAc，1 mM EDTA（pH 7.0），現(xiàn)用現(xiàn)配。

2. 電泳操作流程

• 樣品加載：

• 使用2-20 μL移液器，避免氣泡；

• 推薦使用Bio-Rad Loading Dye（貨號(hào)161-0434），含甘油與追蹤染料（溴酚藍(lán)/二甲苯青）。

• 電泳參數(shù)：

• DNA分離：150 V，60分鐘（7×10 cm凝膠）；

• RNA分離：60 V，90分鐘（7×7 cm凝膠）；

• 蛋白質(zhì)分離：120 V，75分鐘（7×10 cm凝膠）。

3. 實(shí)驗(yàn)后維護(hù)

• 清潔與消毒：

• 使用去離子水沖洗凝膠托盤(pán)，避免使用有機(jī)溶劑；

• 70%乙醇擦拭電極與外殼，紫外照射30分鐘滅菌。

• 儲(chǔ)存條件：

• 凝膠盤(pán)與梳子4℃保存，電極室溫干燥保存；

• 長(zhǎng)期停用時(shí)，拆除電極并覆蓋防塵罩。

四、常見(jiàn)問(wèn)題解答

Q1：如何解決電泳條帶拖尾？
A：

1. 檢查上樣量是否超載（DNA≤500 ng/孔，RNA≤1 μg/孔）；

2. 確認(rèn)緩沖液未重復(fù)使用超過(guò)3次；

3. 降低電壓至100 V以下，延長(zhǎng)電泳時(shí)間。

Q2：凝膠托盤(pán)漏液如何處理？
A：

1. 檢查密封條是否老化或破損，更換密封條（貨號(hào)170-4406）；

2. 確保凝膠托盤(pán)與底座對(duì)齊，避免側(cè)向壓力；

3. 緩沖液液面高度不超過(guò)凝膠盤(pán)邊緣3 mm。

Q3：如何延長(zhǎng)電極使用壽命？
A：

1. 定期使用細(xì)砂紙打磨電極表面氧化物；

2. 避免在緩沖液中添加高濃度SDS（≤0.1%）或尿素（≤8 M）；

3. 電泳結(jié)束后立即拆卸電極，用去離子水沖洗。